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蛋(dan)(dan)(dan)白純化要利(li)(li)用(yong)不同蛋(dan)(dan)(dan)白間內在的相似性與差(cha)異(yi)，利(li)(li)用(yong)各種(zhong)蛋(dan)(dan)(dan)白間的相似性來除(chu)去非(fei)蛋(dan)(dan)(dan)白物(wu)質的污(wu)染，而利(li)(li)用(yong)各蛋(dan)(dan)(dan)白質的差(cha)異(yi)將(jiang)目的蛋(dan)(dan)(dan)白從其他蛋(dan)(dan)(dan)白中純化出來。每種(zhong)蛋(dan)(dan)(dan)白間的大小、形狀、電荷、疏水(shui)性、溶解度和生物(wu)學活性都會有差(cha)異(yi)，利(li)(li)用(yong)這些差(cha)異(yi)可將(jiang)蛋(dan)(dan)(dan)白從混合(he)物(wu)如(ru)大腸桿菌裂解物(wu)中提取(qu)出來得到(dao)重組蛋(dan)(dan)(dan)白。

二、適用范圍

動物血清、腹水的濃(nong)縮、提純。

三、抗體純化特點

粗純純度＞90%；

精細純度＞98%

四、試劑盒組成（可單次純化100mg）

五、純化步驟

（一）粗純

①取待純化抗(kang)體(ti)6ml，加入6ml磷酸鹽緩沖(chong)液進行稀釋,再加入12ml粗純純化液，搖勻1分鐘；

②立即8000prm/min離(li)心(xin)5min，棄去(qu)上清，得(de)到沉淀物；

③加入復溶液，復溶。
（二）精細純化

①親和柱用去(qu)離(li)子水(shui)洗去(qu)20%乙(yi)醇，再(zai)用結合液清洗2遍；

②用結合液(ye)稀釋抗體濃度為1mg/ml，上樣，控制流速為20秒/滴(di)；

③抗(kang)體(ti)流完后加入原抗(kang)體(ti)等體(ti)積結合液沖洗柱內抗(kang)體(ti)；

④結合液流(liu)完后(hou)加入洗(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)液，洗(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)目的蛋(dan)白，取(qu)1.5ml離(li)心管收集洗(xi)脫(tuo)(tuo)(tuo)液得到抗體(ti)溶(rong)液；

⑤目(mu)的蛋白(bai)測蛋白(bai)濃(nong)度；

⑥用(yong)20%乙醇(chun)保(bao)存(cun)柱(zhu)子，于4℃冰箱(xiang)中保(bao)存(cun)，可反復使用(yong)10次以(yi)上(shang)。

七、 注意事項

①操作置于室溫(wen)進行(xing)，所用溶液用前先回溫(wen)，上樣前均需要用0.2微(wei)米濾膜過濾。

②避免樣(yang)品反(fan)復凍融和劇烈攪動，以防蛋白質的變性。

④精純(chun)抗體上樣前需要用0.2微(wei)米濾膜(mo)過濾。

⑤蛋白濃度不要高(gao)于1mg/ml。

⑥親和柱在使用過程中，要求液體不能流干，基質中不得有氣泡存在。

⑦上樣前(qian)，樣品需離心或用濾(lv)膜過濾(lv)，以防堵塞柱子。

⑧樣品過渡(du)裂(lie)解會引起蛋白(bai)變性，降(jiang)低結(jie)合載量(liang)，采(cai)用溫和的裂(lie)解方法，增加結(jie)合載量(liang)。需要(yao)控制上樣和洗脫時流速(su)讓(rang)其(qi)有(you)足夠(gou)的吸附和分(fen)離(li)時間，以便達到最大的結(jie)合載量(liang)。

⑨蛋(dan)白(bai)的性質、pH、溫度等(deng)也(ye)會影響(xiang)蛋(dan)白(bai)的結合載量。

八、貯藏條件及保存期

    貯(zhu)藏(zang)條件(jian)：-4℃

保 質 期： 12個(ge)月