粒徑： 100nm-300nm

激發/發射：365/610nm

Ⅰ.  微球的清洗

一般取(qu) 1mg 微球(10mg/ml) 標記 0.1mg 抗體，不同項目可進行兩邊濃度(du)摸索(suo)優化。

具體操作流程如下：

1.100ul 微球 + 900 ul 標記緩沖液（50mM MES,pH 6.0，或者0.05MPBS,pH 6.0）；

2.17000rpm,離心(xin) 20min，第一遍；

3.去掉(diao)上清，用 1000ul 標記緩沖液重懸微球(qiu)；

4.17000rpm,離(li)心 20min，第二遍；

5.去掉上清，用(yong) 1000ul 標記緩沖液重(zhong)懸(xuan)微(wei)球（離心后微(wei)球重(zhong)懸(xuan)可使用(yong)水(shui)浴超(chao)聲儀，建議(yi)功率(lv) 500-700W，超(chao)聲時(shi)長 2-5min，下同），備用(yong)。

Ⅱ.  微球的活化

各稱取 20mg NHS 和(he) EDC，用(yong)標(biao)記緩沖液溶解，現用(yong)現配，即 20mg/ml NHS 和(he) EDC； 取 20ul NHS，加入(ru)到清(qing)洗后的微球中，快速混勻；

然后再取(qu) 5ul EDC 加入(ru)到微球(qiu)中，快速混勻； 室溫(wen)孵育，20-30min。

Ⅲ.  清洗去除殘留 EDC將活化后的微球：

1.17000rpm,離心 20min，第(di)一遍；

2.去掉(diao)上清(qing)，用 1000ul 標記緩沖(chong)液重懸微(wei)球；

3.17000rpm,離(li)心 20min，第二(er)遍(bian)；

4.去掉上清，用(yong)(yong) 1000ul 標記緩沖液重(zhong)懸微球(qiu)，備用(yong)(yong)。

IV.  微球與抗體的偶聯

取 0.1mg 抗體(ti)溶(rong)解于（50mM MES,pH 8.5，或者0.05MPBS,pH 8.5）于 2ml 離心管中，加入活化后的微球，快(kuai)速混勻后，室溫孵育，3 小時。

Ⅴ.  封閉

配制 20mg/ml 的 BSA，即稱(cheng)取 20mg BSA,用(yong)終濃(nong)度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解，備(bei)用(yong)。

微球標記抗體后，加入 100ul 上述封閉液（含 BSA），室溫孵育 1 小時。 Ⅵ.  去除未結合的抗體

此步驟目的是通過(guo)高速離心的方法去除游離的未結合微(wei)球(qiu)的抗體；

具體流程如下：

1.17000rpm,離心 20min，第一遍；

2.去掉上清，用(yong) 1000ul 稀(xi)釋(shi)液（50mM PBS，pH 7.4 或(huo) 50mM Tris，pH 8.0）重懸微球(qiu)；

3.17000rpm,離(li)心 20min，第(di)二遍(bian)；

4.去掉上清，用 1000ul 稀釋液重懸(xuan)微球(qiu)，即為抗體-微球(qiu)標(biao)記復(fu)合物，4℃放置備(bei)用， 如長(chang)期(qi)保存需加入終濃度為 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。

注意事項

1. 保存條件：本產品需要于 2-8℃保存，切勿冷凍；

2. 本產品在(zai)使用(yong)前確認處(chu)于均(jun)勻(yun)的懸浮(fu)狀態，有輕微(wei)結塊可(ke)以用(yong)超聲(sheng)去除；

3. 本產品活化后建議立即(ji)進(jin)行(xing)偶聯實驗，活化狀(zhuang)態不(bu)宜長時間(jian)保(bao)存；

4. 本產(chan)品僅供(gong)科研使用(yong)。