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通用名稱(cheng)：犬細粒棘球絳蟲抗原ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Hydatid（ Hyd） coproantigens Test Kit for Canine.

【用途】 本試劑盒(he)采用夾(jia)心ELISA方法定性檢(jian)測犬糞(fen)細粒棘(ji)球絳蟲抗原。

【規格】 96T/盒

【儲藏與有效期】 2～8℃保(bao)存，有效期12個月。

【試劑盒組成】

【溶液配制】

1. 洗(xi)滌液配制：用蒸餾水或(huo)去離(li)子水將洗(xi)滌液 10×按 1:9 稀釋，充分混勻即為工作濃度洗(xi)滌液。

2. 樣品稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液配制：用蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去離子(zi)水(shui)將樣品稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液 2×按1:1 稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)（如取100mL 濃縮樣品稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液加(jia) 100mL 蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去離子(zi)水(shui)），充分(fen)混(hun)勻即為工作濃度(du)樣品稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液。

【實驗準備】所有試劑使用前恢復至室溫(25℃左右)，以免(mian)溫度過低影響抗(kang)原抗(kang)體(ti)反應。

【樣品要求】
1. 本試劑適用于檢測犬糞樣品；
2. 應(ying)采集新鮮(xian)的犬(quan)糞樣品進行(xing)測(ce)試。若不能及(ji)時檢測(ce)，應(ying)將(jiang)糞樣低溫凍(dong)(dong)存(cun)，防止腐敗或反復凍(dong)(dong)融。如犬(quan)糞難以溶(rong)解，應(ying)適當(dang)搗碎處理(li)。

【操作步驟】

1. 樣品處理：犬糞樣品需要預先低溫（ -70℃以下） 冷凍 7 天以上，以滅活蟲卵。稱取 1克犬糞,加入1mL樣品稀釋液，充分攪拌混勻，靜置10分鐘，再3000rpm離心10分鐘，取上清液待檢。
2. 加(jia)樣(yang)反(fan)應：樣(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)，每(mei)(mei)孔(kong)(kong)僅加(jia)入(ru)100μL待檢樣(yang)品(pin)(pin)；陰(yin)性(xing)對(dui)照2孔(kong)(kong)，每(mei)(mei)孔(kong)(kong)僅加(jia)入(ru)100μL陰(yin)性(xing)對(dui)照品(pin)(pin)；陽(yang)性(xing)對(dui)照 2 孔(kong)(kong)，每(mei)(mei)孔(kong)(kong)僅加(jia)入(ru) 100μL 陽(yang)性(xing)對(dui)照品(pin)(pin)。蓋好封板膜(mo)，37℃避光反(fan)應30分鐘(zhong)。

3. ;洗板：甩去(qu)孔內(nei)液體，每孔注滿工(gong)作(zuo)濃度洗滌液洗板3 次(ci)，每次(ci)均需靜置1分鐘；最后一次(ci)甩凈，拍干。

4. 加酶(mei)反(fan)應：每孔(kong)加酶(mei)結合物100μL，蓋好封板(ban)(ban)膜，37℃避光反(fan)應30分鐘。甩去(qu)孔(kong)內液體，如上洗(xi)板(ban)(ban)，拍干。

5. 顯(xian)色反(fan)應：按所需用量，臨(lin)用前取等體積底物(wu)液和顯(xian)色液充分(fen)混勻(yun)后每孔加100μL，蓋好封板膜，37℃避光反(fan)應10分(fen)鐘(zhong)。

6. 終(zhong)止反應：加(jia)終(zhong)止液50μL，用酶標儀于(yu)450nm波(bo)長(chang)（630nm作為參比波(bo)長(chang)）讀取OD值。

【結果判定】

1. Cut-off 值（COV）=陰性對照平均OD值×2.1（陰性對照孔OD 值＜0.15 時按0.15計）。
2. 有效性判定：
陰性對照孔 OD 值≤0.30（ 若大于 0.30 則實驗無效）；
陽性對照孔(kong) OD 值≥0.50（ 若(ruo)小于 0.50 則實驗無效）。

【判定標準】

樣品 OD 值≥COV， 判為犬細粒棘球絳蟲抗原陽性；
樣品 OD 值＜COV， 判(pan)為犬細粒棘球絳(jiang)蟲抗(kang)原陰性。

【檢驗方法的局限性】本試劑盒僅供篩查，不作為(wei)確診依據。